Date post: | 13-Nov-2023 |
Category: |
Documents |
Upload: | independent |
View: | 1 times |
Download: | 0 times |
Osnova prednášky z Genetiky mikroorganizmov (7)
Morfológia bunky baktérií. Genetický materiál v bunke baktérií
(chromozóm a plazmidy). Rozmnožovanie baktérií.
Vznik nových kombinácií a rekombinácií génov v bunkách baktérií.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Bunka baktériíBunka bakterií je obalená
plazmatickou membránou a bunkovou stenou.Hlavná zložka bunkovej steny je peptidoglykan
(uhľovodíkový polymér priečne viazaný bielkovinami). Chromozóm (molekula dsDNA) a ostatné bunkové
organely nie sú chránené membránou.Ribozómy baktérií
sú rozptýlené v cytoplazmea ich sedimentačná konštanta je 70S.
Na povrchu bunky baktérií môžu byť brvy a bičíky.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Brvy
Plazmatickámembrána
Bunkovástena
ChromozómdsDNA
Ribozóm
PlazmidydsDNA
Bičík
Štruktúra bunky baktérií (Bacteria)Baktérie sú organizmy,
ktoré nemajú chromozóm chránený membránou.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
1µm
Bunka baktérie Pseudomonas aeruginosa.Elektrónmikroskopický záber získaný po pokovení.Füller, H.: Buňka a život. Orbis : Praha. 1974. 337 s.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Baktéria Pseudomonas fluorescens.Postlethwait, J. H. - Hopson, J. L. - Veres, R. C..: Biology! Bringing science to life.
New York - McGraw-Hill. Inc., 1991, 614 s. ISBN 0-07-050631-0
GENOVA© 2005 Milan Bežo
1µm
Baktérie Proteus mirabilis.Elektrónmikroskopický záber získaný po pokovení.Füller, H.: Buňka a život. Orbis : Praha. 1974. 337 s.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Genetický materiál baktérií
Genetický materiál baktérií tvorí (-ria):(a) chromozóm (nukleoid),
(b) plazmidy.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm baktérií
Chromozóm baktérií je molekula dsDNA.
Obsahuje hlavnú časť genetickej informácie bunky baktérie, asi 3 500 génov.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm baktériíChromozóm(-my) baktérie tvorí (-ria):
Jedna kružnicová molekula dsDNA, (väčšina druhov baktérií).
Dve a viac kružnicových molekúl dsDNA. Napríklad Rhodobacter sphaeroides, Agrobacterium
tumefaciens, Brucella melitensis a iné druhy.Jedna lineárna molekula dsDNA. Napríklad Borrelia burgdorferi.
Jedna molekula dsDNAv rovnováhe lineárnej a kružnicovej formy.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm
Pozdĺžny rez bunkou druhu Escherichia coli.Zväčšenie 75 000 x
Füller, H.: Buňka a život. Orbis : Praha. 1974. 337 s.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
100 µm
Izolovaný kruhový chromozóm baktérie Escherichia coli.Hopson, J. L. - Wessels, N. K .: Essentials of Biology. New York - McGraw-Hill Publishing Company, 1990, 865 s. ISBN
0-07-557108-0
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Lineárna molekula DNA baktérií
Konce lineárnej DNA v bunke baktérií (a) sú citlivé na štiepenie nukleázami v bunke,
(b) musia mať špeciálne mechanizmy DNA syntézy.Teloméry, konce
lineárnej molekuly dsDNA, sú (a) vlásenkové, (b) invertrónové.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Vlásenková teloméra lineárneho chromozómu baktérií
Palindromické vlásenkychránia dvojreťazcovú DNA
(chýbajú voľné konce) chromozómu baktérií pred enzymatickým štiepením.
Palindróm – usporiadanie prvkov s rovnakým významom čítania priamo a spätne.
OKOAAATTTTTTAAA
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Invertrónová teloméra lineárneho chromozómu baktérií
Invertrónové telomérydvojreťazcovej DNA chromozómu baktérií sú pred enzymatickým štiepením chránené
naviazaním bielkovín na 5´–konce.
Bielkovina na 5´konci reťazca DNA
(TP bielkovina)
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Replikácia DNA lineárnej molekulyv bunke baktérií
Invertrónové teloméry majú bielkoviny kovalentne viazané na 5´konce molekuly DNA
(5´-terminálne bielkoviny, v skratke TP).DNA polymeráza sa viaže na TP telomér
a katalyzuje kovalentné väzby medzi TP a deoxynukleozid trifosfátmi (dTNP).
DNTP naviazané na TP majú voľné 3´-OH skupiny, ktoré pôsobia ako prajmery (očká) pre
predlžovanie reťazca molekuly DNA.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Replikácia DNA lineárnej molekulyv bunke baktérií
Vlásenkové teloméry majú mnohonásobne opakujúce sa poradia nukleotidov
párujúce sa spolu do reťazca, kde sú replikované priebežne.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Plazmidy baktérií
Plazmid je molekula dsDNA, menšia v porovnaní s chromozómom, ktorá má doplnkovú nie nevyhnutnú genetickú informáciu pre baktériu.
Plazmid môže prechádzať z jednej
bunky baktérie do druhej.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
DNA plazmidov baktérií
Molekula DNA plazmidov môže byť vo forme (a) kružnicovej,
(b) lineárnej. Niektoré druhy alebo kmene baktérií
(genus Streptomyces) majú kružnicové aj lineárne dsDNA plazmidy.
Plazmidy môžu byť voľne v bunke (neintegrovaný plazmid) alebo začlenené
do chromozómu baktérie (integrovaný plazmid).
GENOVA© 2005 Milan Bežo
PlazmidyChromozóm
Delenie bunky
Neintegrovaný plazmid v bunke baktérie.Plazmid sa množí spolu s replikáciou dsDNA chromozómu
pred delením bunky a samostatne, nezávisle na delení bunky.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm s integrovaným
plazmidom(epizóm)
Deleniebunky
Chromozóm Plazmid
Integrovaný plazmid (epizóm) v bunke baktériePlazmid sa množí spolu s replikáciou dsDNAchromozómu baktérie pred delením bunky.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Plazmidy baktérií I
Plazmidy fertility, "F plazmidy". Gény tra (transfer genes)
plazmida fertility podporujú presun kópie plazmida pri konjugácii baktérie
z darcovskej bunky do bunky príjemcu. Plazmidy fertility nemajú žiadne iné funkcie,
okrem podporovania konjugatívnehoprenosu kópie plazmida.
Napríklad F plazmid baktérie Escherichia coli.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
F- bunka. Bunka bez F plazmida.Bunka príjemcu.
F+ bunka. Bunka s F plazmidom.Bunka darcu.
Hfr bunka (high frequency of recombination).
F plazmid je spojený s linearizovaným chromozómom.
F plazmidy v bunke baktérií.Hfr bunky majú vysokú početnosť rekombinácií.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm F plazmid+b
c
a
d
b
c
a
d b
c
a
d
b
c
a
db
c
a
d
Hfr kmeň II.Hfr kmeň I.
Mechanizmus vzniku Hfr kmeňov baktérií.GENOVA© 2005 Milan Bežo
Plazmidy baktérií II
Plazmidy odolnosti (rezistencie), "R plazmidy". Plazmidy s génmi,
ktoré zabezpečujú hostiteľskej bunke baktérie odolnosť voči jednému
alebo viacerým antibakteriálnymfaktorom, tak ako sú antibiotiká
(ampicilín, penicilín, a iné) a meď. Napríklad plazmid RP4 baktérie Pseudomonas
a iných druhov baktérií.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Gén odolnosti vočiampicilínu (AmpR)
Gén odolnosti vočitetracyklínu (TetR)
Plazmid pBR322
R plazmidy v bunke baktériíPlazmidy odolnosti (rezistencie)
baktérií voči antibiotikám.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Plazmidy baktérií III
Plazmidy pre kolicíny, "Col plazmidy". Plazmidy s génmi, ktoré kódujú
bielkoviny kolicínys toxickým účinkom na iné baktérie.
Napríklad plazmid ColE1baktérie Escherichia coli.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Plazmidy baktérií IV
Plazmidy degradatívne "Deg plazmidy". Plazmidy, ktoré umožňujú hostiteľkým baktériám
metabolicky využívať neobvyklé molekuly, ako sú toluén a kyselina salycilová. Napríklad plazmid TOL baktérie
Pseudomonas putida.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Plazmidy baktérií V
Plazmidy infekčné, "Ti plazmidy". Zabezpečujú infekčnosť hostiteľskej baktérie
na inom organizme. Napríklad Ti plazmidy
(nádory tvoriace – Tumor indikujúce)baktérie Agrobacterium tumefaciens,
podmieňujú tvorbu nádorov na dvojklíčnolistových rastlinách.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Agrobacterium tumefaciens
Rastlina s nádorom(tumor)
Chromozóm
Ti plazmids T–DNA
Plazmid infekčný – Ti plazmidTi plazmidy majú T –DNA (transformačnú DNA),
ktorá zodpovedá za vznik nádorov, syntézu opínov (látok potrebných pre baktérie)
a potlačenie diferenciácie buniek rastliny.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Spôsoby rozmnožovania baktérií
Baktérie sa rozmnožujúDelením.
Priame, priečne delenie bunky.Pučaním.
Vytvorenie novej bunky na povrchu bunky.Spórami.
Vytvorenie dehydratovaného útvaru spóry. Spóry umožňujú baktériám prekonať nepriaznivé
podmienky výživy.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Rozmnožovanie baktérií delenímDelenie buniek baktérií je priame.
Zdvojí sa chromozóm a bunka sa priečne rozdelí.Zdvojenie chromozómu syntézou DNA.
DNA je enzymaticky naštiepená a 5´koncom pripojená k plazmatickej membráne. Na rozvinutých reťazcoch
sa syntetizujú komplementárne reťazce. Konce sa spoja do kružnicovej dsDNA.
Rast povrchových štruktúr bunky oddelí chromozómy.Rozdelenie bunky.
Bunková priehradka rozdelí bunku na dve samostatné bunky.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm (DNA)
Bunka s chromozómom
Rozostupovanie chromozómovpo ich zdvojení
Dve nové bunkyRast bunkovej membrány
Delenie bunky baktérieGENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm,molekula DNA
Zdvojenie chromozómu
syntézou DNA
Vytvorenie priehradky
z plazmatickej membrány
a bunkovej steny
Rozmnožovanie baktérií delením bunky.
Vznik dvoch nových buniek baktérie.Delenie trvá 20´.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Rozmnožovanie baktérií pučanímVytvorenie novej bunky na povrchu bunky.Nová bunka má vlastnú (novú) bunkovú stenu.
Nová bunka je vždy menšia ako pôvodná. Získava chromozóm po jeho zdvojení od pôvodnej bunky a postupne dorastá do pôvodnej veľkosti.
Dve samostatné bunky
Bunka baktérie s chromozómom
Pučanie bunky
Pučanie baktérií.
Rozmnožovanie baktérií spóramiSpóra baktérií je extrémne odolná forma tvorená
bunkou (rody Bacillus, Clostridium)v podmienkach nedostatočnej výživy.
Spóry prežívajú vo vriacej vode pri 100 0C, pôsobení UV žiarenia, nebezpečných chemikálií
a dlhotrvajúcom suchu.Spóry sú životaschopné
aj po niekoľkých sto rokoch.Veľkosť, tvar a poloha spóry v bunke
sú geneticky podmienené.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Endospóra baktérií. Spóra vytvorená vo vnútri bunky baktérie.
Endospóra
ObalDNA
Bunka baktérie s chromozómom
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Cytoplazma Stena spóry Spóra
Spóra baktérie (endospóra).Postlethwait, J. H. - Hopson, J. L. - Veres, R. C..: Biology! Bringing science to life. New York - McGraw-Hill. Inc.,
1991, 614 s. ISBN 0-07-050631-0
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Vznik nových kombinácií génov v bunke baktérií
1. Priamym kontaktom buniek baktérií, konjugácia baktérií (sexuálny proces).
2. Bez priemeho kontaktu buniek baktérií.2.1 Transdukciou,
alebo prenosom časti chromozomálnej alebo plazmidovej DNA pomocou vírusov.
2.2 Transformáciou, voľným vniknutím samostatnej DNA chromozómu
alebo plazmida do bunky príjemcu.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Konjugácia baktérií
F plazmid kóduje tvorbu bŕv, ktoré zabezpečujú kontakt bunky darcu a príjemcu.
Pri kontakte buniek vzniká konjugačný mostík, ktorým je pretlačený nasyntetizovaný reťazec
ssDNA do bunky príjemcu.Po premene ssDNA na dsDNA
je kópia F plazmida v hostiteľskej bunke.Bunka s F plazmidom môže okamžite konjugovať
s bunkou bez F plazmida.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Bunkydarcu (F+) príjemcu (F-)
Konjugatívny plazmid
Pri konjugácii buniek baktérií je kópia F plazmida pretlačená z bunky darcu (F+)
do bunky príjemcu (F-) cez konjugačný mostík.
Konjugačný mostík
F+ F+
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Konjugácia baktérií.http://tidepool.st.usm.edu/crswr/bactconjug.html (2004–03–23)
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Rekombinácie génov v bunke baktériíF plazmid sa môže začleniť do chromozómu
hostiteľskej bunky, linearizovať chromozóm a prelačiť chromozóm cez konjugačný mostík
do bunky príjemcu. Prenos celého chromozómu Escherichia coli
trvá 90 minút. Väčšinou sa bunky mechanicky oddelia skôr ako sa uskutoční presun celého chromozómu.
Medzi homologickými úsekmi chromozómov baktérií sa rekombináciou vymieňajú gény.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
F plazmidChromozóm Bunka darcu F+
Bunka príjemcu F-
Pretlačenie chromozómu integrovaným F plazmidom pri konjugácii baktérií.
Výmena genetického materiálu pri priamom kontakte buniek baktérií.
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Thr Leu Lac
Thr Leu Lac
F-
Hfr +
+++---
++PôvodnéThr+ Leu+ Lac+
RekombinovanéThr- Leu+ Lac+
aleboThr+ Leu- Lac-
PôvodnéThr- Leu- Lac-
Možnosť rekombinácie génov (alely + a -) pri konjugácii baktérií.
Thr – gén pre syntézu aminokyseliny treonín. Leu – gén pre syntézu aminokyseliny leucín. Lac – gén pre enzým štiepenia laktózy.
+ alela génu ”norma” (funkčný gén). – alela mutantná(gén nie je funkčný, produkt génu nezabezpečuje syntézu).
GENOVA© 2005 Milan Bežo
Chromozóm
Vírus
Bunka baktéries cudzorodou
DNA
Transdukcia baktérií.Prenos časti chromozómálnej alebo
plazmidovej DNA medzi bunkami baktérií pomocou vírusov.
GENOVA© 2005 Milan Bežo